一、无菌室操作具体要求
无菌室要求：
1.必须建立无菌室管理系统。
2.保持良好的卫生习惯。最好安装相对湿度为40％至60％，温度为20至22°C的空调设备。
3.禁止在无菌室内进行其他工作，并且不能将所有未用于操作的物体放置在实验室中，或者在检查后将剩余的样品存储起来。
4.紫外线灯的使用寿命通常为300小时。达到使用日期时，应记录使用时间并进行更换。
无菌操作及要求
举例说明无菌实验过程，以菌落和大肠菌的总数为准。
1.实验前准备：
消毒实验室工作台，手和检查设备（确保无菌环境和无菌实验室用品）。微生物的理想环境是无菌的，但是需要保护自己。您必须穿戴防护服，口罩和手套。
通常，用75％的乙醇或铈溶液擦拭并消毒实验室台表面。
为了保持无菌过程，请对手掌，手腕以及可能残留细菌的区域进行消毒。
实验室设备，如实验室药品和样品盒应进行消毒。
实验前检查培养液，并在无菌条件下称量样品。
1）实验前，检查大肠杆菌类型培养基的量和气道中是否有气泡。
2）打开超净风扇的电源，并在空气流通缓慢的无菌条件下工作。
3）对于无菌称重，实际上最好在此步骤戴上手套。
无菌接种的例子
1）干热灭菌的吸管在使用前经过火焰灭菌。
2）无菌抽吸
3）无菌接种
微生物研究所的工作人员必须具有严格的无菌概念，许多实验应在无菌条件下进行。主要原因是：
一种是防止在测试操作过程中样品的人为污染。第二是确保工作人员的安全，并防止由于不当操作而检测到的病原细菌对个人造成污染。
要求如下：
无菌室的使用和管理要求
1.摄影棚应矮，平，面积小，高2.2-2.3米。内部应平整光滑，没有颠簸或拐角。墙壁和屋顶应使用不易渗透的材料制成，且应易于擦洗和消毒。
2.房间的照明面积很大，您应该可以从外面看到内部。
3.为确保无菌室的清洁，应在无菌室周围安装缓冲走廊，并在走廊旁安装缓冲室。它的面积可以小于无菌室的面积。
4.灭菌室，缓冲通道和缓冲室配有荧光灯和紫外线灯，以对空气进行消毒。紫外线杀菌灯应距离工作台1米，电源开关应位于室外。
5.在灭菌室和缓冲室的入口和出口处滑动门，门和窗应平整，门缝应密封，两扇门应错开以避免空气对流污染。
6.无菌室的使用和管理
（1）无菌室应保持清洁，仅应存放必要的检查设备，例如酒精灯，酒精棉，火柴，镊子，输液针和接种环。不要包含与测试无关的任何内容
（2）将室内检查设备和凳子放置在适当的位置，不要随意移动它们。
（3）每2至3周用2％的碳酸盐溶液擦拭工作台，门，窗，桌子，椅子和地面，然后用3％的碳酸盐溶液用空气喷雾消毒，最后用紫外线照射30分钟。
（4）应定期检查室内空气的无菌性，细菌数应控制在10个以下，不符合要求的，应立即进行彻底消毒。如何在无菌室中测量无菌程度：取3块常规肉汤琼脂板和3块改良的Martin培养基板（直径均为9 cm），将它们放在无菌室的每个工作位置并盖上盖子。打开并暴露30分钟，然后倒置进行培养，将细菌总数在37°C的培养箱中放置48小时，对于霉菌计数，将其在27°C的培养箱中放置5天。合格的细菌和霉菌总数不应超过10。
（5）在消毒室内进行消毒之前，请将所有物品放在操作部件中（检查目标除外），并打开UV灯30分钟以进行消毒。一段时间后，关闭紫外线灯并使用。
（6）进入灭菌室之前，必须在缓冲室中更换已灭菌的工作服，工作帽和工作鞋。
（7）为了保持无菌状态，请严格按照无菌操作规程进行操作，并且在操作过程中请勿讲话或发出声音。
设备和场所的灭菌
进行微生物检测的设备和位置必须经过消毒或消毒，并且不同的物品采用不同的处理方法。
1.高压蒸汽灭菌：将工作服，口罩，稀释剂等置于高压灭菌器中。通常在121°C下灭菌30分钟。当然，每种培养液都有不同的要求，必须单独处理。
2.火焰灭菌：输液针和环可以直接进行火焰灭菌。
3.高温干燥和灭菌：将各种玻璃制品，注射器，吸管等在干燥箱中于160°C灭菌2小时。
4.一般消毒：不能在消毒室内对凳子，工作台，试管架，天平，容器或包装进行消毒。应该使用其他方法进行消毒。用2％的碳酸盐或lysole溶液擦拭并消毒。员工的手也以这种方式消毒。
5.空气消毒：打开紫外线灯30-60分钟。
准备好了
1.首先对灭菌室中的空间进行灭菌，然后打开紫外线灯30-60分钟。
2.与测试有关的设备在移至灭菌室之前必须进行单独灭菌。
3.操作员进入无菌室之前，必须清洁和消毒双手，并穿着无菌工作服，帽子和鞋子。
4.进入无菌室后，请再次消毒双手并进行检查。
驾驶注意事项
1.动作应轻而不能太快，以免搅动空气并增加污染。玻璃产品也应小心处理以避免对环境的损害。
2.该操作应在靠近火焰的地方进行。
3.在使用前后，必须焚烧金属设备，例如输液环和输液针。焚烧时，请通过内部加热干燥残留物，然后进行焚烧和消毒。
4.使用吸管时，请勿直接用嘴吸烟或吹吸。
5.观察平板时，打开盖子并不容易。如果要拾起并检查菌落，则需要在火焰附近操作它。板盖无法张开，但顶盖和底盖已正确切开。
6.如果用可疑病原体对涂片染色，则应使用夹子固定玻片。为避免污染，请勿用手直接握住幻灯片。使用过的载玻片还需要在消毒之前浸泡在消毒剂中进行消毒。
7.工作结束后，清洁工作台样品和设备，最后用消毒剂擦拭工作台。
